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分子诊断:实时PCR

目前,分子诊断机构设计聚合酶链反应(PCR),这是对于大量的发展的动力 诊断的方法 的疾病,基于遗传物质的确定。 为了进行实时PCR,使用基因片段(特别是 所述核酸) 的病原体,其未在其他个体中发现的。

PCR的原理是有一定的病原体的DNA片段数百万次通过DNA聚合酶在一个特殊的单元中,被称为热循环仪,其提供温度制度的对于给定的程序的循环重复的乘法。

诊断PCR允许重复一系列扩增,保持酶的活性。 当扩增发生顺利,在一个周期中的一条特殊病原体双打中,DNA的拷贝数30次循环后 - 一百一十。 这就是为什么在PCR诊断被用于确定足够小的病原体,其中所述识别的没有它是不可能的。

应当指出的是,RNA不能实时PCR的模版。 因此,为了扩增之前检测病毒RNA获得DNA与它的相应的片段相关联。 聚合酶链反应允许产生的DNA和RNA测定病原体。 由此获得的信息用于监测治疗的使用的有效性,以及临床预后的评估。

此外,实时PCR,不需要相对于与靶DNA或扩增子,其用作阻挡到正确的诊断的解密额外的动作,并导致错误的结果。 这种方法使得它可以不使用电泳工序,从而导致了聚合酶链式反应的降低风险的产品。 此外,由于在与代理操作数量的减小,降低了调查时,它简化了工艺,降低了错误的可能性。 PCR还允许您指定临床试验的病原体的DNA拷贝的初始数量,以帮助确定病情加重的时期,并及时采取措施,药到病除。

今天,有大量的实时固定的扩增方法。 最常用的各种技术施加的扩增子与,其辐射强度的变化取决于扩增子的积累,并通过调用的光模块的热循环仪的特殊装置的装置中,实时记录荧光探针相关。 它提供了分析的灵敏度的一个高的水平。 同时PCR产物可以用电泳它在某些情况下是没有注意到的时候被检测到,与副产物量大一起,在同一时间。

通过PCR使用了实时阳性和阴性对照样品。 因此,在一项研究中阳性和阴性样品分析作为单独的样本,其特征在于,在每个此类样品中引入并通过所有分析步骤的对照样品。

今天,有大量的用于执行装置的 聚合酶链式反应。 这些措施包括Bio-Rad公司,Applied Biosystems公司,造父变星和罗氏。 他们每个人都有优点和缺点

应当指出的是,PCR - 在大规模科学,研究和世界各地的诊断中心使用,诊断的方法,因为它提供了进行结果的直接解释的机会。

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